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MLPA
(Multiplex
Ligation-dependent
Probe
Amplification)
原理說明：
MLPA(Multiplex ligation-dependent Probe amplification)，是由荷蘭的Dr. Schouten JP所帶領的研發團隊於2002年發表，是一種靈敏度極高的相對定量技術，乃利用簡單的雜合(hydriation)、連接(ligation)及PCR增福(PCR amplication)反應，於單一反應管內可同時偵測最多40個不同的核苷酸序列的拷貝數變化。
至今此技術已應用於多種領域的研究及基因診斷上，如染色體數目異常(Trisomy13、18 & 21)、遺傳疾病基因缺失重複(如SMA、DMD基因…等)、基因甲基化偵測(如Prader-Willi syndrome (PWS) and Angelman syndrome (AS))、抑癌基因診斷(如Breast cancer、Lung cancer…等)及mRNA分析等。至今已發展出的檢測探針種類，已超過上百種。
由於MLPA操作簡便、成本低廉、應用領域廣，這幾年來，已超過有上百篇的研究報告發表。在歐洲，更有多家遺傳醫學中心及實驗室採用此技術發展出的系統，協助進行多項基因檢測的工作。
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MLPA原理圖 |
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說明：MLPA透過設計的專一探針組(如1A,1B;
2A, 2B)，可以黏合(anneal)至目標序列，若完全黏合，則連接酵素(ligase)會將兩條探針連接為(1A+1B)及(2A+2B)之片段，可利用通用引子組(Primer
X及Primer Y)進行PCR增幅反應，將(1A+1B)及(2A+2B)片段增幅，以利後端片段分析。若目標序列缺失(deletion)或產生突變，則兩條探針組無法連接成功，則不會有(1A+1B)或(2A+2B)之增幅產物。
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MLPA的優點：
靈敏度高(High Sensitive)
MLPA每次反應只需大約20 ng之DNA或10 ng之 RNA即可，為南方氏雜合(Southern-blots)
及微陣列(micro-arrays)反應所須之1/100~1/1000，且毋須準確定量。
專一性高(Specific)
利用MLPA可檢測序列中單一核苷酸的改變。
再現性高(Reproducible)
利用40-100 ng之DNA檢體進行檢測，其每一探針之變異係數(Coefficient of variability)僅3-8%。
簡單(Simple)
每一反應只需在同一試管內進行，可獲得多達30-40個訊號值，這個反應中已經包含了內控制組，重覆組及偵測的標的基因，可用於進行反應的品管監控。
高處理速度(High Throughput)
MLPA搭配自動化設備，可在三小時內同時處理96個檢體。檢體從DNA萃取、反應至結果分析，僅需兩個工作天。此外，因為所使用的反應條件皆相同，可以平行處理不同的檢驗項目。
低試劑成本(low cost per data point)
MLPA試劑組中已經包含所有反應需要的試劑及酵素，而且只需具備PCR
machine, Sequencer，一般的分子生物實驗室，皆可進行所有的項目。每一反應所須之試劑成本僅約台幣650元，而一個反應中最多可得到30-40個訊號值，故單一訊號值(data
point)成本僅約台幣20元。
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